Горячая линия: 8-800-555-222-9 (Звонок по России бесплатный)
Телефон в Москве: (495) 921-4991 (с 9:00 до 18:00)
E-mail: info@panavir.ru
Лауреат премии правительства российской федерации 2013
Распоряжение №230-р от 20 февраля 2014г. Правительства Российской Федерации
Вопрос-ответ
ЗАДАЙ ВОПРОС
СПЕЦИАЛИСТУ
Герпес
Всё о герпесе

Что такое герпес?

Герпес при беременности

Герпес тела
Лечение герпеса
Памятка пациента с вирусом герпеса

Лечение генитального герпеса

ПАНАВИР - быстрое лечение герпеса
Новости
Для врачей

Для пациентов


Подписка на новости медицины

Чтобы подписаться на новости медицины введите Ваш адрес электронной почты в поле ниже
Подробнее о подписке





Научные публикации
Совершенствование терапии цитомегаловирусной инфекции у мужчин

ВПЧ-инфекция шейки матки: перспективы комплексного лечения

Хронический эндометрит в практике акушера-гинеколога

Видео
Герпес
Вирус папилломы человека
ОРВИ
Конференции по гинекологии
Награды Панавир


Действия препарата Панавир на синтез белков вируса простого герпеса 1 и 2 типов в клетках, зараженных in vitro

НИИ вирусологии РАМН
Кущ А.А.

Материалы и методы.

Вирусы.

В работе были использованы следующие штаммы вируса простого герпеса (ВПГ): ВПГ-1 – штамм F, ВПГ-2 – штамм G, любезно предоставленные проф. Л. Перейра (Медицинский Центр Университета г. Сан-Франциско, Калифорния, США).

Клетки.

Для анализа анти-ВПГ активности препарата использовали клетки перевиваемой линии Vero, являющиеся высокочувствительными к ВПГ. Клетки Vero культивировали в среде Игла с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки, глютамина и гентамицина.

Препарат Панавир.

Препарат Панавир был предоставлен в виде сухого порошка. Разведения препарата, содержащие различные концентрации Панавира, готовили на питательной среде для выращивания клеток без добавления сыворотки.

Профилактическая схема.

Для определения профилактического противовирусного эффекта препарата Панавир культуру клеток Vero обрабатывали за 24 часа до инфекции. Использовали следующие концентрации препарата: от 1000 мкг/мл до 2,5 мкг/мл. Клетки инфицировали ВПГ-1 и ВПГ-2 с инфекционной множественностью (ИМ) от 0,01 БОЕ/мл до 0,00001 БОЕ/мл (БОЕ – бляшкообразующая единица).

Определение действия на инфекционную активность вируса.

Для анализа действия препарата Панавир на инфекционную активность ВПГ-1 и ВПГ-2 препарат вносили в культуру клеток Vero, зараженных ВПГ-1 и ВПГ-2 с ИМ 0,001 БОЕ/кл и 0,0001 БОЕ/кл и культивировали до развития полного цитопатического действия (ЦПД) в контроле (без препарата), которое наблюдалось через 4 дня. Вируссодержащую культуральную жидкость, отобранную на 4 день, вносили в свежие неинфицированные клетки без добавления препарата Панавир. Об инфекционной активности вируса в опытных и контрольных образцах судили по развитию ЦПД.

Влияние препарата Панавир на синтез белков ВПГ в вирулицидной схеме.

Для оценки влияния препарата Панавир на синтез белков ВПГ клетки Vero, выращенные на покровных стеклах, заражали ВПГ-1 и ВПГ-2 с ИМ 0,001 и 0,0001 БОЕ/кл. Препарат Панавир в концентрации 10 мкг/мл вносили в момент заражения. Клетки, инфицированные ВПГ-1, фиксировали через 24 и 48 часов. Клетки, инфицированные ВПГ-2, фиксировали через 48 и 72 часа. Фиксированные препараты клеток окрашивали моноклональными антителами (МКА) к сверхранним, ранним и поздним белкам ВПГ методом непрямой иммуннофлюоресценции (НИФ).

Результаты.

Ранее нами было показано, что препарат Панавир обладает относительно низким цитотоксическим и антипролиферативным действием в отношении перевиваемых клеток линии Vero: 50%-ная цитотоксическая доза (ЦД50) составляет 1000 мкг/мл. Также было показано, что Панавир в концентрации 10 мкг/мл обладал способностью тормозить развитие вирусспецифического ЦПД, вызванного ВПГ-1 и ВПГ-2 при заражении с ИМ 0,001 БОЕ/мл.

Изучение профилактического действия препарата показало, что при концентрации 5,0 мкг/мл препарат Панавир подавлял ЦПД как ВПГ-1, так и ВПГ-2 с ИМ 0,001 БОЕ/кл на 90%, а при концентрации 10 мкг/мл – на 50% (табл.1).

При анализе ИМ 0,0001 БОЕ/мл ВПГ 1 и 2 типа было показано, что препарат Панавир вызывает 50%-ное подавление инфекционной активности вируса при концентрации 2,5 мкг/мл.

Изучение продукции инфекционно активного вируса показало, что происходит торможение вирусспецифического ЦПД на 2-3 суток.

Результаты анализа экспрессии вирусных белков в клетках Vero, обработанных препаратом Панавир в момент заражения, представлены в табл.2. Было показано, что препарат Панавир не подавляет экспрессию всех трех исследованных белков ВПГ-1 при заражении с ИМ 0,001 БОЕ/мл через 48 часов после инфицирования. Через 24 часа после заражения ВПГ-1 с ИМ 0,001 и 0,0001 БОЕ/мл наблюдали экспрессию сверхранних и ранних белков. Что касается поздних белков, то было показано, что препарат Панавир подавляет накопление данных белков через 24 часа после инфицирования.

Изучение действия препарата Панавир на экспрессию белков ВПГ-2 показало, что экспрессия сверхранних и ранних белков была одинаковой при заражении с ИМ 0,0001 БОЕ/мл через 48 и 72 часа после инфицирования. Экспрессия поздних белков была низкой (менее 10% окрашенных клеток) при ИМ 0,001 БОЕ/мл через 72 часа после инфицирования и не наблюдалась при остальных вариантах исследования. При заражении клеток Vero ВПГ-2 с ИМ 0,0001 БОЕ/мл было показано, что препарат Панавир полностью подавляет экспрессию всех трех вирусных белков от момента заражения и вплоть до 48 часов после инфицирования.

Таблица 1. Профилактическое действие препарата Панавир на клетки Vero, зараженные ВПГ 1 типа и ВПГ 2 типа.

Показатель

ВПГ-1

ВПГ-2

Множественность инфицирования, БОЕ/мл

0,1

0,01

0,001

0,0001

0,1

0,01

0,001

0,0001

ИД50, мкг/мл

 

-

 

-

 

10

 

5

 

-

 

-

 

10

 

5

ИД95, мкг/мл

 

-

 

-

 

5

 

2,5

 

-

 

-

 

5

 

2,5

ХТИ

-

-

100

200

-

-

100

200

Примечание. Химиотерапевтический индекс (ХТИ) вычислялся как отношение ЦД50 к ИД50. ЦД50 =1000 мкг/мл.

Таблица 2. Экспрессия белков ВПГ-1 и ВПГ-2 в клетках Vero в присутствии препарата Панавир.

Белки ВПГ

ВПГ-1

 

ВПГ-2

множественность инфицирования, БОЕ/мл

0,001

0,0001

0,001

0,0001

0,001

0,0001

0,001

0,0001

сроки инфицирования, часы.

24

48

48

72

сверхранние

(α)

 

 

++

 

+

 

+++

 

+++

 

+

 

-

 

++

 

+

ранние (β)

++

+

+++

+++

+

-

+

+

поздние (γ)

-

-

+++

+

-

-

+

-

Примечание:

«+»         – менее 10% окрашенных клеток;

«++»      – менее 50% окрашенных клеток;

«+++»    – более 50% окрашенных клеток;

«-»          – нет окрашенных клеток.

Заключение.

  1. Препарат Панавир полностью подавляет экспрессию поздних белков ВПГ 1 типа через 24 часа после заражения с ИМ 0,001-0,0001 БОЕ/мл.
  2. Препарат Панавир полностью подавляет экспрессию поздних белков ВПГ 2 типа через 48 часов после заражения с ИМ 0,001 БОЕ/мл и через 72 часа после заражения с ИМ 0,0001 БОЕ/мл.
  3. Препарат Панавир полностью подавляет экспрессию всех изученных (сверхранних, ранних и поздних) белков ВПГ 2 типа в течение 48 часов после заражения с ИМ 0,0001 БОЕ/мл.
  4. Химиотерапевтический индекс (ХТИ) для препарата Панавир, рассчитанный как отношение ЦД50/ИД50, в условиях наших опытов равен 100-200 для ВПГ 1 и 2 типа в профилактической схеме исследований.




Отзывы, вопросы, комментарии врача (0)


Задать вопрос, написать отзыв

Тема:
Имя:
Вопрос, отзыв:
E-mail: